淺論婦科養坤丸質量標準探究論文

【摘要】目的建立婦科養坤丸的質量標準，以更好控制產品質量。方法採用薄層色譜（TLC）法鑑別黃芩、木香、延胡索、甘草，以HPLC法測定黃芩苷的含量。結果TLC法可檢出黃芩、木香、延胡索、甘草，斑點清晰，陰性對照無干擾，專屬性強。黃芩苷在0.0576～1.44μg範圍內線性良好(r=0.9999)，平均加樣回收率爲97.85%，RSD爲0.86%。結論實驗方法定性、定量方法簡便、可靠、準確，可用於婦科養坤丸的質量控制。

【關鍵詞】婦科養坤丸黃芩苷薄層色譜高效液相色譜

1器材

1.1儀器

DionexSummit高效液相色譜儀(P680HPLCPump,ASI-100AutomatedSampledInjector,PDA-100PhtodiodeArrayDetecter，STH585ColumnOven)Chromeleon數據處理系統；賽多利斯萬分之一電子天平（德國）；電子數控式恆溫水浴鍋（江蘇崑山醫用設備廠）；硅膠G，硅膠GF254（青島海洋化工廠生產）。

1.2樣品與試藥

婦科養坤丸：自制(批號050825，050903，050920)；去氫木香內酯對照品（供薄層鑑別用，批號111525-200404）；延胡索乙素對照品（供薄層鑑別用，批號110726-200409）；甘草次酸對照品（供薄層鑑別用，批號110723-200411），黃芩苷對照品（供含量測定用，批號110715-200514）均由中國藥品生物製品檢定所提供；甲醇爲色譜純；水爲超純水，其他化學試劑均爲分析純。

2方法與結果

2.1薄層鑑別

2.1.1黃芩的薄層鑑別取本品11g，研細，加醋酸乙酯-甲醇（3∶1）30ml，迴流30min，濾過，蒸乾，加5ml甲醇，取上清液作爲供試品溶液。取去黃芩的模擬處方，按供試品溶液的製備方法，依法制備陰性對照品溶液。取黃芩苷對照品，加甲醇製成每毫升含1mg的溶液，作爲對照品溶液。吸取上述兩種溶液各6μl，分別點於同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水-甲醇（5∶3∶0.6∶1.5∶0.8）爲展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鐵試液，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾。結果見圖1。

2.1.2木香的薄層鑑別取本品6g，研細，加氯仿10ml，超聲處理30min，濾過，濾液作爲供試品溶液。取去木香的模擬處方，按供試品溶液的製備方法，依法制備陰性對照品溶液。取去氫木香內酯對照品，分別加氯仿製成每毫升含0.5mg的溶液，作爲對照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各5μl，分別點於同一羧甲基纖維鈉爲黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚-乙醚（5∶3.5）爲展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1％香醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾。結果見圖2。

2.1.3延胡索的薄層鑑別取本品11g，研細，加甲醇50ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10ml溶解，加濃氨試液調至鹼性（pH9～10），用乙醚提取3次，10ml/次，合併乙醚液，用稀硫酸溶液提取3次，10ml/次，合併稀硫酸液，加氫氧化鈉試液調至鹼性（pH11～12），再用乙醚提取3次，10ml/次，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作爲供試品溶液。取去延胡索的模擬處方，按供試品溶液的製備方法，依法制備陰性對照品溶液。取延胡索乙素對照品，加甲醇製成每毫升含1mg的溶液，作爲對照品溶液。吸取供試品溶液與陰性對照溶液各10μl，對照品溶液2μl，分別點於同一以羧甲基纖維素鈉爲黏合劑硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-正丁醇-濃氨水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.8）爲展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的暗黃色熒光斑點。陰性對照無干擾。結果見圖3。

2.1.4甘草的薄層鑑別取本品水蜜丸11g，研細，或大蜜丸18g，剪碎，加硅藻土12g，研勻，加乙醚60ml，加熱迴流1h，濾過，藥渣加甲醇40ml，加熱迴流1h，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，20ml/次，合併正丁醇液，用水洗滌3次，蒸乾，殘渣加入鹽酸5ml，再加氯仿50ml超聲提取30min，濾過，取氯仿提取液，蒸乾，殘渣加甲醇2ml溶解，作爲供試品溶液。取甘草次酸對照品，加甲醇製成每毫升含2mg的溶液，作爲對照品溶液。取缺甘草的其它藥材製成的蜜丸18g，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法［1］試驗，吸取上述三種溶液各1～2μl，分別點於同一羧甲基纖維鈉爲黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以石油醚-醋酸乙酯-冰醋酸（25∶9∶0.5）爲展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾。結果見圖4。

2.2黃芩苷的含量測定

2.2.1色譜條件與系統適用性實驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠爲填充劑，色譜柱爲AgillentC18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相爲甲醇－0.1%磷酸溶液(47：53)；檢測波長爲280nm；流速1.0ml·min-1；柱溫25℃。理論塔板數按黃芩苷峯計算應不低於2500。

2.2.2對照品溶液的製備精密稱取在60℃減壓乾燥4h的黃芩苷對照品適量，加甲醇製成每毫升含60μg的溶液，即得。

2.2.3供試品溶液的製備取本品10g，研碎，取約0.5g，精密稱定，置100ml錐形瓶中，加70％乙醇50ml，精密稱定，超聲提取（150W，35kHz）30min，放冷，精密稱定，以70％乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4專屬性實驗按處方比例和工藝，同法制成全方缺黃芩的的陰性對照液，按樣品供試液的製備方法制備，測定。表明:在與黃芩苷對照品色譜的相應位置上無干擾峯出現，說明方中其它成分對測定結果無影響。黃芩苷對照品、供試品和陰性對照品的HPLC圖譜見圖5。

2.2.5線性關係考察取黃芩苷對照品溶液（0.060mg/ml）自動進樣1，5，10，15，20，25μl，按上述色譜條件設定峯面積，以峯面積（Y,mAu*sec）對進樣量（X，μg）進行線性迴歸，得迴歸方程爲Y=2220.2X-0.6294，r=0.9999；表明黃芩苷在0.0576～1.44μg內線性關係良好。

2.2.6精密度實驗取黃芩苷對照品溶液（0.060mg/ml），重複進樣6次，10μl/次，按上述條件測得峯面積，RSD＝0.36%，表明精密度符合要求。

2.2.7穩定性實驗取對照品溶液和供試品溶液分別於0，2，4，8及12h，各自動進樣6μl，按上述色譜條件測定峯面積，對照品溶液和供試品溶液的`RSD分別爲0.87%，1.14%。表明12h內對照品和供試品均穩定。

2.2.8重複性實驗按上述的含量測定方法，對同一批樣品（批號：050825）製備供試液，平行做5份，測得峯面積，計算含量，結果RSD＝1.18%，表明重複性良好。

2.2.9加樣回收率實驗精密稱取已知含量的同一批樣品(批號050825)6份，精密加入對照品適量，揮幹溶劑，按供試品溶液製備項下操作。按色譜條件測定峯面積，計算回收率。結果見表1。表1加樣回收率實驗結果（略）

2.2.10樣品的測定取3批樣品按含量測定項下的方法提取、測定並計算含量，每份樣品測定3次取均值。結果見表2。表2樣品測定結果（略）

3討論［2,3］

黃芩苷爲多酚羥基黃酮苷類化合物，採用70％迴流提取轉移率較高，但雜質較多，經比較，結果表明採用醋酸乙酯－甲醇（3∶1）迴流提取，可顯著減少水溶性雜質的溶出；提取樣品含有較多脂溶性成分，在薄層上容易過載形成拖尾，影響鑑別，經實驗，蒸乾提取溶劑後的殘渣採用乙醚振搖提取可很好的去除大部分雜質，黃芩苷基本無損失，乙醚不溶部分採用甲醇溶解，可獲得較好的重複性。甘草中甘草酸的穩定性較差，研究採用將甘草酸水解成甘草次酸進行鑑別，可獲得較好的重複性。

本品中黃芩僅佔全方藥材不足10%，因此理論溶媒用量較《中國藥典》爲大；採用甲醇或乙醇提取可顯著降低雜質提取量，有利於保護色譜柱，故本次實驗分別對70％乙醇、無水乙醇、甲醇等提取溶媒的超聲提取30min，1，2h和迴流提取2，3，4h進行了考察，結果顯示採用70％乙醇超聲30min提取效果最好，操作簡單、快速。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2000：附錄VIB.

［2］陳錦容.婦科十味片的薄層色譜鑑別［J］.中華臨牀醫藥，2003，4（23）：115.

［3］白志川，于傑，劉圓.中藥複方中的甘草和紅花的薄層色譜定性鑑別［J］.西南農業大學學報（自然科學版），2004，26（5）：629.