《恆古骨傷愈片中橙皮苷含量的檢測方法》論文
恆古骨傷愈片是由中成藥恆古骨傷癒合劑(收載於《國家中成藥標準彙編 骨傷科分冊》)改變劑型而製成的新制劑[1],藥味由陳皮、紅花、三七等9味中藥組成,具有活血益氣、補肝腎、接骨續筋、消腫止痛、促進骨折癒合的功效,用於新鮮骨折及陳舊骨折、股骨頭壞死、骨關節病、腰椎間盤突出症等。爲控制本品的質量,本試驗採用高效液相色譜(HPLC)法測定了恆古骨傷愈片中橙皮苷的含量,作爲其內在質量控制指標之一。
1 儀器與試藥
日本島津LC-10 AT高效液相色譜儀;SPD-10A紫外檢測器;KQ-250型超聲波處理器。
橙皮苷對照品購於中國藥品生物製品檢定所(批號1107221-200211,HPLC面積歸一化法,測定含量爲99.99%);恆古骨傷愈片由吉林萬德製藥有限公司提供(批號20080401, 20080402,20080403,20080501,20080502,20080503,20080504, 20080505,20080506,2008057)。其他所用化學試劑均爲國產AR級。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱:Shim-pack-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm);流動相爲乙腈-0.4%磷酸水(20∶80);流速:1 mL/min;紫外檢測波長:283 nm;理論塔板數按大黃素計算不低於5 000;柱溫爲室溫[2]。
2.2 對照品溶液的製備
精密稱取橙皮苷對照品適量,加甲醇製成每1 mL約含0.05 mg的溶液,即對照品溶液。
2.3 供試品溶液的製備
取本品20片,研細,取約0.3 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,稱定重量,超聲提取(功率180 W、頻率60 kHz)30 min,取出,放冷,再稱定重量,加甲醇補足減失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,即得。
2.4 陰性對照溶液的.製備
按處方量製備不含陳皮藥材的陰性樣品,按供試品溶液的製備方法制備陰性對照溶液。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL,注入液相色譜儀中,按上述色譜條件測定。結果表明,陰性對照溶液色譜圖中與對照品相應位置處無干擾,此法可行。
2.5 線性關係考察
精密稱取橙皮苷對照品適量,加甲醇製成每1 mL含橙皮苷0.048 5 mg的對照品溶液。精密吸取對照品溶液4、8、12、16、20 μL注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,測定其峯面積。以峯面積值(A)對進樣量(C)進行迴歸,得到迴歸方程爲:Y=1 008 770.377X+25 623.859,r=0.999 9,結果表明,橙皮苷在0.194~0.970 μg範圍內進樣量與峯面積呈良好的線性關係。
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