蝴蝶蘭組培的研究進展研究論文

蝴蝶蘭，蘭科蝴蝶蘭屬植物，屬熱帶、亞熱帶氣生蘭。原產於菲律賓、印度尼西亞、泰國、馬來西亞和我國臺灣等地，其株型美觀、花形奇特似蝶、枝葉繁茂， 花朵碩大、花色鮮豔、花期持久，觀賞價值極高， 在熱帶蘭中素有“蘭花皇后”的美譽，有較高的觀賞和經濟價值，深受國內外花卉市場的歡迎。但是，由於蝴蝶蘭是單莖性氣生蘭， 植株很少發育側枝， 很難採用常規分株方式進行無性繁殖。 其種子也不含胚乳或其他組織， 在自然條件下萌發率極低， 因此無法利用播種方式進行有性繁殖。而採用組織培養方法進行種苗繁殖是目前蝴蝶蘭大規模生產的唯一途徑。蝴蝶蘭快速繁殖的途徑主要是利用無菌播種和利用各種類型的外植體誘導類原球莖， 進而誘導分生苗實現快繁， 不用透過誘導愈傷組織而直接分化叢生芽。

蝴蝶蘭組培快繁的影響因素

1.無菌播種途徑

蝴蝶蘭種子的胚發育不完全，不易發芽，用人工合成的培養基促使種子無菌萌發，可以得到較高發芽率。種子培養過程中使用的培養基有KC、MS、花寶等，其中改良KC 培養基是蝴蝶蘭種胚萌發的理想培養基。對不同無菌播種方法包括撒播法、塗布法、稀釋法進行了比較，結果表明稀釋法較好，種子分佈均勻，利用率高，明顯減少轉接次數，且原球莖發育健壯整齊【1】。果齡採收期也影響着無菌播種效果。

也可採用無菌播種途徑快繁蝴蝶蘭，能夠在短期內獲得大量幼小植株，且技術簡單、成本較低，是現階段經濟有效的快速繁殖方法，也是工廠化育苗的重要途徑【2】。但由於蝴蝶蘭種子苗是一種雜交品系，因此後代變異率高，除了少數自花系列較穩定以外，難以形成品質均一的大規模栽培品種。因此，在採用無菌播種進行蝴蝶蘭種苗生產時，要對父母本進行嚴格的選擇，以確保後代性狀的儘可能一致。

2.類原球莖途徑

原球莖是蘭科植物組織培養產生的特有現象，透過離體器官誘導原球莖快繁法獲得試管苗基本一致，增殖係數較高，變異性較少，適合大規模繁殖，是蘭花組培快繁的一個主要形式。

近年來， 國內外學者對蝴蝶蘭的組織培養技術進行了大量研究， 蝴蝶蘭組織培養誘導原球莖的外植體有莖尖、葉片、花梗腋芽、花梗節間切段等誘導類原球莖， 進而誘導分生苗實現快繁。

蝴蝶蘭的繁育方法有兩種叢生芽和原球莖增殖。原球莖增殖容易出現變異，採用叢生芽增殖能夠很好的保持原有品種的特性【3】。還可利用花梗腋芽、葉片等作爲外植體接種在不同培養基上進行離體培養，再利用誘導產生的不定芽的莖尖進行莖尖培養，可得到大量的原球莖狀體【4】。由於莖尖作外植體誘導原球莖誘導率、週期性，但損傷母株，而且還會有不同程度的污染率【5】，故利用腋芽萌發的不定芽的幼葉爲外植體，雖然誘導率稍低，但大大降低了污染率。

大量研究表明， 在蝴蝶蘭進行組織培養過程中， 選取的外植體不同， 原球莖的誘導率也有很大差異， 其中幼葉、莖尖、花梗腋芽是蝴蝶蘭原球莖誘導的較佳外植體， 葉片和根段的誘導效果最差。但是，採用莖尖作外植體會對植株造成損傷，因此蝴蝶蘭的組織培養通常以幼葉或花梗腋芽爲外植體。

3.培養基的選擇與激素的添加

蝴蝶蘭組織培養採用的基本培養基有MS、1/2MS、VW、B5、KC、花寶及其改良型等。在原球莖的誘導過程中，不同的蝴蝶蘭品種和外植體對最適培養基的選擇有所不同，其中以MS基本培養基最爲常用，且適當減少培養基中大量元素和部分微量元素的添加量有利於原球莖的增殖。

一般情況下，原球莖在基本培養基上即可增殖、分化，但在基本培養基中附加適量激素或其他添加物可顯著促進原球莖的增殖與分化。目前，在蝴蝶蘭組織培養中常用的激素有GA3、6 - BA、NAA、2， 4 - D 和IAA等。

蝴蝶蘭組織培養中不同階段對培養基和激素配比的要求也不同【6】。蝴蝶蘭無菌播種誘導胚狀體以MS7爲基礎培養基，添加100 g/L新鮮土豆汁效果較好，有利於原球莖的分化和生長。在誘導胚狀體時激素濃度要求較低，在胚培養時，只加MS培養基的部分成分即可，添加細胞分裂素和生長素易使胚生長畸形或抑制胚的生長。並在MS7培養基中，隨着NAA濃度的升高，生根率呈現先升後降的趨勢，單獨使用NAA誘導生根，濃度以0.5 mg/L爲好，高濃度BA抑制生根。因此，誘導蝴蝶蘭生根的較爲理想的激素配比爲BA0.1 mg/L+NAA0.5 mg/L，植株生根率高，根數多，生根長。

利用已過盛花期帶休眠芽的花梗作爲外植體材料，透過對不同配比的培養基和激素的選擇，其中發現花梗腋芽最佳誘導培養基爲1/2MS+BA2.5 mg/L+NAA0.2 mg/L，即隨着BA濃度的增大，蝴蝶蘭花梗腋芽誘導率逐漸升高，在相同時間內，細胞分裂素的增加，芽誘導率也隨之增加【3】。繼而利用不同激素和濃度的培養基對蝴蝶蘭進行增殖培養，發現：1/2MS+BA3. 5 mg/l+KT1.0 mg/L+NAA0.5mg/L+10%椰汁最有利於蝴蝶蘭叢生芽的'增生，且葉片健壯。

取花梗腋芽誘導獲得的無菌苗的葉片作叢生芽誘導材料、莖尖作原球莖誘導的材料。研究發現：花梗腋芽的叢生芽誘導培養基以1/2MS+6-BA5.0 mg/L+NAA2.0+CM15%培養基最合適，其中增殖仍需高濃度6-BA與低濃度的NAA混合使用。葉片誘導叢生芽以1/2MS+6-BA5.0 mg/L +NAA2 mg/L+香蕉泥10.0%+AC0.2%的培養基最宜，可見葉片叢生芽誘導仍需較高濃度的6-BA 和中等濃度的NAA 及香蕉泥混合使用【4】。叢生芽增殖階段1/2 MS+6-BA7 mg/L+NAA0.5 mg/L+香蕉泥10%+AC0.2%培養基效果最好，可見叢生芽的增殖仍需高濃度6-BA與低濃度的NAA 混合使用。

4光譜LEDs的影響

光譜對植物的生長髮育、形態建成、光合作用、物質代謝以及基因表達均有調控作用， 透過光質調節和控制植株形態建成和生長髮育， 可使植株在一定程度上滿足人們生產需要。單色紅光處理的蝴蝶蘭組培苗徒長， RBG(紅光/藍光/綠光) 處理組全部生根， 單色藍光處理的組培苗根系活力最高。紅藍組合和單色藍光處理的葉片色素含量高於白光， 葉綠素a /b比值、葉綠素a /類胡蘿蔔素比值