雙柏凝膠劑中大黃素測定實驗論文

1 儀器與試藥

1.1 儀器高效液相色譜儀（日本島津）：LC-10ATvp雙泵，SLC-10Avp控制器，SPD-10Avp紫外檢測器，CTO-10ASvp柱溫箱。

1.2 試藥大黃素對照品由中國藥品生物製品檢定所提供（批號爲0756-9908）；甲醇爲色譜純；大黃、黃柏、澤蘭、側柏葉、薄荷由柳州市神農中藥飲片廠提供，經柳州市中醫院藥檢室鑑定，符合《中國藥典》要求；其餘試劑均爲分析純。

2 方法與結果

2.1 凝膠劑的製備取處方量的`大黃（A）和根據雙柏散處方比例稱取藥材粗粉（B），均加95%乙醇浸泡6 h，以5～7 ml/min的速度滲漉提取，相應滲漉液濃縮至約50 g，加入3 g 卡波姆940，密閉放置過夜使其充分溶脹，加蒸餾水至100 g，研勻即得。分裝於密閉避光的容器中，貯存於涼處。A：大黃凝膠；B:雙柏凝膠

2.2 建立測定方法

2.2.1 色譜條件

色譜柱爲選Kromasil- C18 柱（5μm，250 mm×4.6 mm）；流動相爲甲醇-水（6:4）；流速1.0 ml/min；檢測波長254 nm；柱溫30℃；進樣量：10 μl。

2.2.2 對照品溶液製備

精密稱取大黃素對照品5 mg，加甲醇溶解定容至25 ml，製成0.2 mg/ml的溶液，即可。

2.2.3 供試品溶液製備

精密稱取凝膠劑1 g，水浴濃縮至近幹，加蒸餾水10 ml，濃鹽酸1 ml，沸水浴中水解30 min，再加氯仿20 ml，超聲振盪20 min，置分液漏斗中分層，取氯仿層；水層用氯仿洗3次，每次10 ml，合併氯仿液，揮幹。加適量甲醇溶解，轉移至10 ml容量瓶中，超聲振盪數分鐘使溶解完全，加甲醇至刻度，搖勻。針孔式微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液作爲供試品溶液。

2.2.4 線性關係

考察精密吸取對照品溶液用流動相稀釋成0.4，1.0，2.0，4.0，10.0 μg·ml-1進樣10 μl測定，以大黃素進樣量（Y）和峯面積（X）進行線性迴歸，求得標準曲線的迴歸方程爲：Y=3 300.3X-1 422，r=0.999 8。結果表明大黃素進樣量在0.4～10 μg·ml-1範圍內有良好的線性關係。

2.2.5 精密度實驗

精密吸取上述對照品溶液10 μl，重複進樣測定5次，結果大黃素峯面積值的RSD=0.59%，表明儀器精密度良好。取供試品溶液，於0，1，2，3 h分別進樣測定峯面積，結果RSD=0.42%。表明供試品在3 h內穩定。實驗全部選擇雄性昆明小鼠可便於取皮操作及結果數據的平行。同時以高效液相色譜法爲離體鼠建立了可靠的體外測定方法，在滲透實驗中，由於面板與介質長時間接觸，面板中蛋白質等物質易脫落，溶解，會導致混濁或呈乳光，本文酸化樣液以遊離出脂溶性大黃素，然後氯仿提取，從而消除了面板中蛋白等成分對色譜柱的影響。